科捷分享丨液相色譜柱安裝與使用說明
HPLC剖析是體系的作業(yè)，每個環(huán)節(jié)都很重要；看似簡略的環(huán)節(jié)，反而簡單疏忽，引起整個試驗的成果偏差，因而養(yǎng)成杰出的習氣是很重要的。色譜柱是色譜體系的心臟，液相色譜柱的正確裝置與運用，是色譜作業(yè)的要害；也是獲得正確牢靠的試驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
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運用儀器:??? LC-600A液相色譜儀
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一·液相色譜柱的裝置
1?????????液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a．空柱由柱接頭柱管及濾片拼裝而成
柱接頭選用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩頭螺紋組件，一端是為7/16英才外螺紋，另一端是3/16英才的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）。7/16英才外螺紋與1/4英寸柱管（￠6.35mm）銜接，中心放置壓環(huán)用于密封。3/16英才的內(nèi)螺紋與1/16英才（￠1.57mm）的銜接收銜接，之間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量削減柱外死體積，在裝置色譜柱時，用￠1.57mm銜接收經(jīng)過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后在擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘揉捏變形后緊箍在銜接收上（銜接收經(jīng)過壓環(huán)后顯露的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺度。
在兩頭柱接頭內(nèi)，柱管兩頭各放置一片不銹鋼濾片（或濾網(wǎng)），用于封堵柱填料不被活動相沖出柱外流失。空柱各組件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑效果。但含氯化物的溶劑對其有必定的腐蝕性，故運用時要留意，柱及銜接收內(nèi)不能長期存留此類溶劑，以避免腐蝕。
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b．?柱填料：
液相色譜柱的別離效果是在填料和活動相之間進行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為填料。依據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10um的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠外表鍵合—CN，—NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：首要是以硅膠為基質(zhì)，在其外表鍵合十八烷基官能團（ODS）的非極性填料。也有無定型和球型之分。常用的其他反相填料還有鍵合C8，C4，C2，苯基等，其顆粒直徑在3-10um之間。
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2?????????色譜柱的裝置
a．?拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型，尺度，出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b．?擰下柱兩頭的密封堵頭放回包裝盒備用。
c．?按柱管上標明的活動相流向，將色譜柱的入口端經(jīng)過銜接收與進樣閥出口銜接（如條件允許，建議在柱前運用維護柱）；柱的出口與檢測器銜接。銜接收是外徑為.57mm、內(nèi)徑為0.1mm-0.3mm的不銹鋼管。銜接收的兩頭均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接收時必定要設(shè)法下降柱外死體積。銜接收經(jīng)過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動停止，再用扳手持續(xù)順時針擰1/4-1/2圈，牢記不要用力太大。如色譜柱經(jīng)過活動相加壓后有漏夜現(xiàn)象，請用扳手順時針擰1/4圈，直至不漏夜停止。
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二·液相色譜柱的運用：
色譜柱在運用前，進行的柱的功用測驗，并將成果保存起來，作為今后評價柱功用變化的參考。但要留意：柱功用或許因為所運用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外做柱功用測驗時是依照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測驗所運用的條件是*條件），只要這樣測驗的成果才有可比性。
1?????????樣品的前處理：
a．?運用活動相溶解樣品。
b．?運用預處理柱除掉樣品中的強極性或與柱填料發(fā)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c．?運用0.45um的過濾膜除掉微粒雜質(zhì)。
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2?????????活動相的裝備：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交流而達到別離的意圖，因而要求活動相具有以下的特色：
a．?活動相對樣品具有必定的溶解能力，保證樣品組分不會沉積在柱中（或長期保留在柱中）。
b．?活動相具有必定的惰性，與樣品不發(fā)生化學反應（特殊情況在外）。
c．?活動相的黏度要盡量的小，以便在運用較長的剖析柱時能得到好的別離效果；同時下降柱壓降，延伸液壓泵的運用壽命（可運轉(zhuǎn)提高溫度的辦法下降活動相的黏度）。
d．?活動相的化學性質(zhì)要與運用的檢測器相適應。如用UV檢測器，運用對紫外吸收較低的溶劑制造。
e．?活動相的沸點不要太低，擔任簡單發(fā)生氣泡，導致試驗無法進行。
f．???在活動相裝備好后，必定進行脫氣。除掉溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以避免活動相中的微量氧與樣品發(fā)生效果。
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3?????????活動相流速的挑選：
因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù)，運用不同的流速可得到不同的柱效。關(guān)于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，運用*流速。對內(nèi)徑為4.6 mm的色譜柱，流速一般挑選1ml/min，關(guān)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。
當選用*流速時，剖析時刻或許延伸。可選用改變活動相的洗刷強度的辦法以縮短剖析時刻（如反相柱時，可適當添加甲醇或乙腈的含量）。
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留意：
1）.因為甲醇的廉價，關(guān)于反相柱推薦運用甲醇體系（有必要運用乙腈的在外）。
2）.關(guān)于正相柱推薦運用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的乙烷做活動相，沒有提純的乙烷不的運用。用水運用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有或許影響剖析的成果。
3）.含水活動相在試驗前制造，尤其是夏天運用緩沖溶液作為活動相不要過夜。加入*，避免細菌的生長。
4）.活動相要求運用0.45um濾膜過濾，除掉微粒雜質(zhì)。
5）.運用HPLC級溶劑裝備活動相，運用合適的活動相可延伸色譜柱的運用壽命，提高柱功用。
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4????????柱功用的測驗：
——啟動液相色譜儀：a. 活動相流速設(shè)定為1ml/min。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? b．UV檢測器波長設(shè)定為254nm。
——運用出廠測驗時運用的活動相組成及測驗樣品。
——記錄并計算測驗成果。
我公司業(yè)務范圍：
1、幫助您建立色譜剖析室及色譜剖析辦法、訓練色譜操作人員.
2、銷售各類進口、國產(chǎn)剖析儀器及有關(guān)配件、標樣、試劑。
3、氣相色譜儀、液相色譜儀、紫外分光光度計、原子吸收分光光度計等各類剖析儀器的裝置調(diào)試、功用改善、維護修補。
4、對外承接樣品剖析檢測任務，給出性檢測報告。
